原核表达与纯化服务
服务描述：
大肠杆菌表达系统是目前最常用，也是最经济实惠的蛋白表达系统，与其他表达系统相比具有遗传背景清楚，目的基因表达水平高，培养周期短，抗污染能力强等特点，是分子生物学研究和生物技术产业化发展进程中的重要工具。本公司的大肠杆菌表达平台可为您提供全方位的重组蛋白生产服务，在表达包括可溶性蛋白、包涵体、融合蛋白等方面，拥有丰富的经验和专业技术，能解决蛋白表达过程中的各种瓶颈问题。
众红优势：
His、GST、MBP、Strep、FLAG等标签多种表达方式同时进行，确保获得最优质的蛋白。
保证蛋白为普通缓冲可溶。
纯化的蛋白经过ELISA，Western-blot，或者其它生物活性验证。
可提供详细的表达纯化条件，实验数据以及菌株。
该服务根据客户构建好的表达载体，并参考客户提供的实验方案，如温度、IPTG诱导浓度及表达时间，选择合适的E.coli菌株进行目的蛋白诱导表达并纯化。如果客户还没有构建好表达载体，我们也可以帮您将目的基因插入到特定的表达载体中，并摸索蛋白表达的最优条件。各项服务需额外加付少许费用。表达出的目的蛋白进行SDS-PAGE电泳和Western blot分析。
具体内容：
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服务步骤 |
具体内容 |
交付内容 |
交付时间 |
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目标基因亚克隆 （可选） |
1.扩增并抽提含有目的基因的载体质粒。 2.将目的基因亚克隆到合适的表达质粒。包括IPTG，阿拉伯糖，热休克，冷休克诱导方式，GST，Strep、MBP，His，HA，Flag，myc等融合标签载体的构建。 3.测序验证构建质粒的准确性。 |
正确构建的重组表达质粒，含重组质粒的DH5α菌株及测序报告。 |
2-3周 |
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E. coli表达菌株转化及筛选 |
1.扩增并抽提构建好的表达质粒。 2.将表达质粒转化到高效的E. coli表达菌株中。 3.至少挑选3个阳性克隆于LB培养基中扩增并选择合适的条件，SDS-PAGE 检测蛋白表达情况，筛选出合适菌株。 |
重组质粒的表达菌株及表达检测报告。 |
2-3周 |
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目的蛋白的诱导表达及纯化 |
1.对蛋白表达时间，温度以及IPTG浓度等表达条件进行优化，并诱导表达目的蛋白。 2.摇瓶培养1L重组细菌，通过亲和层析，离子交换，疏水及凝胶过滤等方法纯化表达的重组蛋白。 3.可根据需求利用蛋白酶去除不需要的纯化标签（可选，注：构建表达载体时需加入合适的蛋白酶切位点），再纯化获得所需的目的蛋白。 4..SDS-PAGE电泳检测每步结果并控制最终产品质量。 5.通过Western-blot验证目标蛋白正确性。 |
≥1mg纯化好的目的蛋白及纯化报告。可按客户要求提供含纯化标签或去除纯化标签的目的蛋白，纯度最高可达95%以上。 |
2-3周 |
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包涵体复性 |
蛋白诱导表达与包涵体纯化 |
大于1mg目的蛋白 |
2-3周 |
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中试工艺研究 |
5~30L高密度发酵，大规模纯化，冻干，对外服务。 |
能够完全重复的中试放大工艺。 |
协商 |
