酵母菌株转化及筛选

毕赤酵母表达菌株转化及筛选

目标基因合成：

1.   从基因库中搜索目标蛋白的cDNA序列。若本公司的cDNA文库中有这个基因，免费提供给客户。

2.   根据选用的表达系统对cDNA进行密码子优化。

3.   合成基因序列。

提供给客户：目标基因（在T载体或常规穿梭载体上）及测序报告。

价格：3.0元/碱基，如果客户直接提供构建好的质粒，则免去这部分费用。

时间：2-3周，根据基因的大小而定。

目标基因亚克隆

1.   扩增并抽提含有目标基因的载体质粒。

2.   将目标基因亚克隆到合适的表达质粒上。

3.   测序验证构建质粒的准确性。 

4.   提供如下表达载体：

提供给客户：正确构建的重组表达质粒，含重组质粒的DH5α菌株及测序报告。

价格：1000.00元/亚克隆。

时间：1-2周。

Pichia Pastoris表达菌株转化及筛选

1.   我公司拥有BioRad Gene Pulser Xcell电转仪及成熟的毕赤酵母转化筛选操作平台。克隆转化率可高达50个/μg质粒以上，阳性克隆率90%以上，上清中目标蛋白表达量达100mg/L以上，目标蛋白占总上清中总蛋白量50%以上，便于后期纯化。

2.   如已有构建好的表达载体，可省去基因合成及亚克隆步骤。扩增并抽提构建好的表达质粒。

3.   将表达质粒转化到高效的Pichia.pastoris表达菌株中。

4.   至少挑选5个阳性克隆扩增并诱导表达目标蛋白。

5.   SDS-PAGE电泳检测培养物中目标蛋白的表达情况。

6.   可提供表达菌株：X33,KM71H,GS115,KM71,SMD1168。

提供给客户：重组质粒的表达菌株及表达检测报告。

价格：1000.00元/ 质粒。

时间：2周。

图1.毕赤酵母克隆上清中目标蛋白的表达

图2. BioRad Gene Pulser Xcell电转仪